El consultorio biomédico de Khram Cuervo Errante

[Khram Cuervo Errante]

y porqué no hay Lactobacillus que sean defectivos para la degradación de lactosa?? Has mirado en el CECT o en el Instituto Pasteur?

Porque viven en la lactosa, por eso.

Podrían utilizar como fuente de carbono la histidina, por ejemplo.

Vamos a ser serios: ¿qué ser vivo degrada un aminoácido como fuente de carbono? Producir un aminoácido es energéticamente costoso. No van a usarse como fuente de carbono a menos que sea total y absolutamente necesario.

Amén de que, en el ambiente que quiere colocarlos Watta, la histidina libre brilla por su ausencia.

Y si no existen, porque no se pueden hacer?

Porque no puedes anular un gen constitutivo de una bacteria sin comprometer su supervivencia. Y una bacteria que no se multiplica, es una bacteria inútil.

Le insertas un plásmido con los genes His + alguna resistencia (no betalactamica)
Seleccionas a los que llevan el inserto mediante crecimiento con la resistencia
Irradias (o les metes Bromuro de Etidio, Naranja de Acridina...) a los pobres Lactobacilus
Los haces crecer en medio con Lactosa y un betalactámico de manera que mates a todos los Lac+

Y con esto, ¿qué consigues? Nada. En primer lugar, porque necesitas un plásmido, con lo que estamos volviendo a la solución que planteé yo. Y en segundo porque te estás complicando la vida con teratógenos, irradiación y dobles cultivos que no llevan a ninguna parte. Hay que buscar la solución más sencilla, no la más compleja. Y el problema tiene una solución bastante fácil de aplicar.

Haces dobles siembras en medio Lac+ y en medio Lac- His+

Y con esto, ¿qué?

y alguna habrá que sea defectiva para usar la Lactosa como fuente de carbono.

Claro, con todo el proceso que tú planteas la probabilidad de encontrar una bacteria así es mínima. Y se trata de maximizar la rentabilidad del proceso.

[TitoHarris]

Porque viven en la lactosa, por eso.
Vamos a ser serios: ¿qué ser vivo degrada un aminoácido como fuente de carbono? Producir un aminoácido es energéticamente costoso. No van a usarse como fuente de carbono a menos que sea total y absolutamente necesario.

Amén de que, en el ambiente que quiere colocarlos Watta, la histidina libre brilla por su ausencia.

Bueno, pero ese es su ambiente natural, lo que se quiere conseguir es un microorganismo mutante.
He comentado el tema de la histidina por poner un ejemplo, bien se podría hacer con otras enzimas para cualquier otra ruta catabólica. O varias a la vez.

Porque no puedes anular un gen constitutivo de una bacteria sin comprometer su supervivencia. Y una bacteria que no se multiplica, es una bacteria inútil.

Pero desde el momento en que transformas a la bacteria, anulas la necesidad de sobrevivir en la lactosa.

te estás complicando la vida con teratógenos, irradiación y dobles cultivos que no llevan a ninguna parte. Hay que buscar la solución más sencilla, no la más compleja. Y el problema tiene una solución bastante fácil de aplicar.

A caso no es sencillo dejar la placa de petri en la campana de flujo con la luz UV encendida durante un tiempo t ??

Y con esto, ¿qué?

Las que crezcan en medio his y no en Lac- habrán sido transformadas y serán defectivas para el gen Lac 

Claro, con todo el proceso que tú planteas la probabilidad de encontrar una bacteria así es mínima. Y se trata de maximizar la rentabilidad del proceso.

Hombre, mínima mínima... 10e-3 ?? haciéndolas crecer en un medio con lactosa + betalactámico bajas alguna magnitud...
Implica hacer mil réplicas, pero creo que alguna habrá y con que solo haya una, ya te vale.

[Khram Cuervo Errante]

Bueno, pero ese es su ambiente natural, lo que se quiere conseguir es un microorganismo mutante.
He comentado el tema de la histidina por poner un ejemplo, bien se podría hacer con otras enzimas para cualquier otra ruta catabólica. O varias a la vez.

Sí, pero viable. Mutante no es lo mismo que inviable, no lo olvides.

Podrías tener un plásmido con un selector para una ruta catabólica especial, sí, como degradar gasolina o algo así, pero sólo como selector. Y de lo que se trata es de que ese mismo selector además sirva para superar una presión ambiental que permita a la bacteria transformada mantener el plásmido.

Pero desde el momento en que transformas a la bacteria, anulas la necesidad de sobrevivir en la lactosa.

No, lo que anulas es su capacidad de sobrevivir, punto. Si a una bacteria que vive de la lactosa le impides vivir de lactosa, lo que tienes es una bacteria muerta.

A caso no es sencillo dejar la placa de petri en la campana de flujo con la luz UV encendida durante un tiempo t ??

¿Y para qué todo ese tiempo t si con una transformación sencilla tardas dos horas en tener tus bacterias?

Las que crezcan en medio his y no en Lac- habrán sido transformadas y serán defectivas para el gen Lac 

Si pones lactobacillus en un medio lac- no crece ninguna, así que en tu medio his+ lo único que tienes son lactobacillus, tanto transformados como no transformados.

Hombre, mínima mínima... 10e-3 ?? haciéndolas crecer en un medio con lactosa + betalactámico bajas alguna magnitud...
Implica hacer mil réplicas, pero creo que alguna habrá y con que solo haya una, ya te vale.

Menos. La probabilidad de tener 1 bacteria transformada de entre 10⁹ células iniciales es de 10^-7. Vamos, que de cada mil millones de bacterias que metes en la transformación, te saldrían 100 colonias transformadas.

Con una ya te vale, pero estamos hablando de hacer dobles defectivos, irradiación, intercalantes, teratógenos... y son bacterias, no Iron Man...

[Rohi]

Macho no entiendo una mierda lo de la recombinación génica para la diversidad de los Ab... Entiendo que cada cadena y subcadena está codificado en un gen diferente y que por splicing y splicing alternativo da la variabilidad chunga (o creo entender). Pero el caso es que dicen que no es lo mismo que un splicing y yo no veo la santa diferencia por ninguna parte... Me puedes ayudar?

[Khram Cuervo Errante]

A ver, rohi... frena. Splicing y recombinación no son lo mismo.

[Rohi]

Pues no entiendo nada, aquí en las diapositivas me pone, por ejemplo, un esquema donde pone recombinación para formar la cadena ligera, y luego en otros dibujos que se forma el bucle del splicing :S

que si recombinación, que si reordenamiento, que si organización genómica... Me puedes decir un poco a grandes rasgos cómo va éste tema para que le pille el punto?

[Khram Cuervo Errante]

Es todo recombinación, Rohi. El problema es que no es una recombinación homóloga normal. Por eso se forman esos bucles que tú llamas de splicing.

[Rohi]

Vale, son recombinaciones específicas de sitio y los bucles son bucles de escisión, no?

[Khram Cuervo Errante]

Así me lo aprendí yo.

[Rohi]

Y ahora la duda es: Y cuándo se producen todas estas recombinaciones si los Lb no se dividen?